-
Aromaterapija Čisto naravno eterično olje listov evkaliptusa za nego kože telesa
Metoda ekstrakcije ali predelave: parna destilacija
Del za ekstrakcijo destilacije: list
Država izvora: Kitajska
Uporaba: Difuzno/aromaterapija/masaža
Rok uporabnosti: 3 leta
Prilagojena storitev: nalepka in škatla po meri ali kot vaša zahteva
Certifikat: GMPC/FDA/ISO9001/MSDS/COA
Evkaliptovo olje reagira s sluzjo in jo razredči, kar zagotavlja takojšnje olajšanje pri pomanjkanju sape in drugih težavah z dihali. Je dovolj močno, da deluje kot repelent proti žuželkam. Pri uporabi v aromaterapiji zagotavlja jasnost misli. Njegove terapevtske koristi so posledica protimikrobnih, antibakterijskih, antiseptičnih, antispazmodičnih in protivirusnih lastnosti. Uporabljajte evkaliptusovo olje proti različnim kožnim in zdravstvenim težavam. Vsebuje evkaliptus, znan tudi kot cineol. Ta spojina bo podpirala vaše splošno zdravje in dobro počutje.
-
Naravno čisto organsko eterično olje sivke za aromaterapijsko nego kože
Metoda ekstrakcije ali predelave: Destilacija s paro
Del za ekstrakcijo destilacije: Cvet
Država izvora: Kitajska
Uporaba: Difuzno/aromaterapija/masaža
Rok uporabnosti: 3 leta
Prilagojena storitev: nalepka in škatla po meri ali kot vaša zahteva
Certifikat: GMPC/FDA/ISO9001/MSDS/COA
-
100 % čisto naravno organsko eterično olje magnolije (Magnoliae Officmalis Cortex Oil) za nego kože
Dišava Hou Po je takoj grenka in ostro pikantna, nato pa se postopoma odpre z globoko, sirupasto sladkostjo in toplino.
Hou Po je povezan z elementoma Zemlja in Kovina, kjer njegova grenka toplota močno deluje na spuščanje energije Qi in suho vlago. Zaradi teh lastnosti se v kitajski medicini uporablja za lajšanje zastojev in kopičenja v prebavilih, pa tudi za kašljanje in sopenje zaradi sluzi, ki ovira pljuča.
Magnolija (Magnolia Officinials) je listopadno drevo, ki izvira iz gora in dolin provinc Sečuan, Hubei in drugih kitajskih provinc. Zelo aromatično lubje, ki se uporablja v tradicionalni kitajski medicini, se olupi s stebel, vej in korenin, nabira pa se med aprilom in junijem. Debelo, gladko lubje, bogato z oljem, ima na notranji strani vijolično barvo s kristalnim sijajem.
Zdravniki lahko razmislijo o kombinaciji eteričnega olja Hou Po z eteričnim oljem Qing Pi kot dopolnilo k zgornjim notam v mešanicah, namenjenih razgradnji kopičenja.
-
OEM paket po meri Naravno olje korenike makrocefalov
Kot učinkovito kemoterapevtsko sredstvo se 5-fluorouracil (5-FU) pogosto uporablja za zdravljenje malignih tumorjev v prebavilih, glavi, vratu, prsnem košu in jajčnikih. 5-FU je zdravilo prve izbire za kolorektalni rak v klinični praksi. Mehanizem delovanja 5-FU je blokiranje transformacije nukleinske kisline uracila v nukleinsko kislino timin v tumorskih celicah, nato pa vpliva na sintezo in popravljanje DNK in RNK, da doseže svoj citotoksični učinek (Afzal et al., 2009; Ducreux et al., 2015; Longley et al., 2003). Vendar pa 5-FU povzroča tudi kemoterapevtsko povzročeno drisko (CID), enega najpogostejših neželenih učinkov, ki pesti številne bolnike (Filho et al., 2016). Incidenca driske pri bolnikih, zdravljenih s 5-FU, je bila do 50 %–80 %, kar je resno vplivalo na napredek in učinkovitost kemoterapije (Iacovelli et al., 2014; Rosenoff et al., 2006). Zato je izjemno pomembno najti učinkovito terapijo za CID, ki jo povzroča 5-FU.
Trenutno so v klinično zdravljenje CID uvajali intervencije brez zdravil in intervencije z zdravili. Intervencije brez zdravil vključujejo razumno prehrano ter dodatke soli, sladkorja in drugih hranil. Zdravila, kot sta loperamid in oktreotid, se pogosto uporabljajo pri zdravljenju CID proti driski (Benson et al., 2004). Poleg tega se za zdravljenje CID v različnih državah uporabljajo tudi etnomedicina s svojo edinstveno terapijo. Tradicionalna kitajska medicina (TKM) je tipična etnomedicina, ki se že več kot 2000 let izvaja v vzhodnoazijskih državah, vključno s Kitajsko, Japonsko in Korejo (Qi et al., 2010). TKM meni, da kemoterapevtska zdravila sprožijo porabo Qi, pomanjkanje vranice, disharmonijo želodca in endofitno vlažnost, kar povzroči prevodno disfunkcijo črevesja. V teoriji TKM bi morala strategija zdravljenja CID temeljiti predvsem na dopolnjevanju Qi in krepitvi vranice (Wang et al., 1994).
Posušene korenineAtractylodes macrocephalaKoidz. (AM) inPanax ginsengCA Mey. (PG) sta tipična zeliščna zdravila v tradicionalni kitajski medicini (TCM) z enakimi učinki dopolnjevanja Qi in krepitve vranice (Li et al., 2014). AM in PG se običajno uporabljata kot zeliščni par (najpreprostejša oblika združljivosti kitajskih zelišč) z učinki dopolnjevanja Qi in krepitve vranice za zdravljenje driske. AM in PG sta bila na primer dokumentirana v klasičnih formulah proti driski, kot sta Shen Ling Bai Zhu San, Si Jun Zi Tang iz ...Taiping Huimin Heji Ju Fang(dinastija Song, Kitajska) in Bu Zhong Yi Qi Tang izPi Wei Lun(Dinastija Yuan, Kitajska) (slika 1). Več prejšnjih študij je poročalo, da imajo vse tri formule sposobnost lajšanja CID (Bai et al., 2017; Chen et al., 2019; Gou et al., 2016). Poleg tega je naša prejšnja študija pokazala, da imajo kapsule Shenzhu, ki vsebujejo samo AM in PG, potencialne učinke na zdravljenje driske, kolitisa (sindroma xiexie) in drugih prebavnih bolezni (Feng et al., 2018). Vendar nobena študija ni obravnavala učinka in mehanizma AM in PG pri zdravljenju CID, bodisi v kombinaciji bodisi samostojno.
Črevesna mikrobiota se zdaj šteje za potencialni dejavnik pri razumevanju terapevtskega mehanizma tradicionalne kitajske medicine (TCM) (Feng et al., 2019). Sodobne študije kažejo, da ima črevesna mikrobiota ključno vlogo pri ohranjanju črevesne homeostaze. Zdrava črevesna mikrobiota prispeva k zaščiti črevesne sluznice, presnovi, imunski homeostazi in odzivu ter zatiranju patogenov (Thursby in Juge, 2017; Pickard et al., 2017). Neurejena črevesna mikrobiota neposredno ali posredno poslabša fiziološke in imunske funkcije človeškega telesa, kar povzroča stranske reakcije, kot je driska (Patel et al., 2016; Zhao in Shen, 2010). Raziskave so pokazale, da 5-FU znatno spremeni strukturo črevesne mikrobiote pri miših z drisko (Li et al., 2017). Zato so učinki AM in PM na drisko, ki jo povzroča 5-FU, lahko posredovani s črevesno mikrobioto. Vendar pa še vedno ni znano, ali lahko AM in PG sama in v kombinaciji preprečita drisko, ki jo povzroča 5-FU, z moduliranjem črevesne mikrobiote.
Da bi raziskali učinke proti driski in osnovni mehanizem delovanja AM in PG, smo uporabili 5-FU za simulacijo modela driske pri miših. Tukaj smo se osredotočili na možne učinke enkratnega in kombiniranega dajanja (AP)Atractylodes macrocephalaeterično olje (AMO) inPanax ginsengskupnih saponin (PGS), aktivnih sestavin, ekstrahiranih iz AM in PG, na drisko, črevesno patologijo in mikrobno strukturo po kemoterapiji s 5-FU.
-
100 % čisto naravno eterično olje Eucommiae Foliuml za nego kože
Eucommia ulmoides(EU) (v kitajščini običajno imenovan »Du Zhong«) spada v družino Eucommiaceae, rod majhnega drevesa, ki izvira iz osrednje Kitajske [1]. Ta rastlina se na Kitajskem zaradi svojega zdravilnega pomena pogosto goji v velikem obsegu. Iz EU je bilo izoliranih približno 112 spojin, vključno z lignani, iridoidi, fenoli, steroidi in drugimi spojinami. Dopolnilna zelišča te rastline (kot je okusen čaj) so pokazala nekatere zdravilne lastnosti. List EU ima večjo aktivnost v primerjavi s skorjo, cvetom in plodom [2,3]. Poročali so, da listi EU krepijo moč kosti in telesne mišice [4], kar vodi do dolgoživosti in spodbuja plodnost pri ljudeh [5]. Poročali so, da okusna formula čaja iz listov EU zmanjšuje maščobo in pospešuje presnovo energije. Poročali so, da flavonoidne spojine (kot so rutin, klorogenska kislina, ferulna kislina in kofeinska kislina) v listih EU kažejo antioksidativno aktivnost [6].
Čeprav je bilo objavljenih dovolj literature o fitokemijskih lastnostih EU, je bilo le malo študij o farmakoloških lastnostih različnih spojin, ekstrahiranih iz lubja, semen, stebel in listov EU. Ta pregledni članek bo pojasnil podrobne informacije o različnih spojinah, ekstrahiranih iz različnih delov (lubja, semen, stebla in listov) EU, in o potencialni uporabi teh spojin za spodbujanje zdravja z znanstvenimi dokazi ter tako zagotovil referenčno gradivo za uporabo EU.
-
Čisto naravno olje Houttuynia cordata, olje Houttuynia cordata, olje Lchthammolum
V večini držav v razvoju se 70–95 % prebivalstva za primarno zdravstveno oskrbo zanaša na tradicionalna zdravila, od tega jih 85 % uporablja rastline ali njihove izvlečke kot aktivno snov.1Iskanje novih biološko aktivnih spojin iz rastlin je običajno odvisno od specifičnih etničnih in ljudskih informacij, pridobljenih od lokalnih zdravnikov, in še vedno velja za pomemben vir za odkrivanje zdravil. V Indiji je približno 2000 zdravil rastlinskega izvora.[2] Glede na široko zanimanje za uporabo zdravilnih rastlin je ta pregled oHouttuynia cordataThunb. ponuja najnovejše informacije s sklicevanjem na botanične, komercialne, etnofarmakološke, fitokemijske in farmakološke študije, ki se pojavljajo v literaturi.H. cordataThunb. spada v družinoSaururaceaein je splošno znan kot kitajski kuščarjev rep. Je trajnica s stolonifernim korenikom, ki ima dva različna kemotipa.[3,4Kitajski kemotip vrste se pojavlja v divjih in poldivjih razmerah na severovzhodu Indije od aprila do septembra.5,6,7]H. cordataNa voljo je v Indiji, zlasti v dolini Brahmaputra v Assamu, in ga različna plemena Assama tradicionalno uporabljajo v obliki zelenjave in v različne medicinske namene.
-
100 % čisto olje Arctium lappa Proizvajalec – naravno limonino olje Arctium lappa s certifikati o zagotavljanju kakovosti
Zdravstvene koristi
Korenino repinca pogosto uživamo, lahko pa jo tudi posušimo in namakamo v čaju. Dobro deluje kot vir inulina, ...prebiotikvlaknine, ki pomagajo pri prebavi in izboljšujejo zdravje črevesja. Poleg tega ta korenina vsebuje flavonoide (rastlinska hranila),fitokemikalijein antioksidante, za katere je znano, da imajo koristi za zdravje.
Poleg tega lahko korenina repinca nudi tudi druge koristi, kot so:
Zmanjšajte kronično vnetje Korenina repinca vsebuje številne antioksidante, kot so kvercetin, fenolne kisline in luteolin, ki lahko pomagajo zaščititi vaše celice predprosti radikaliTi antioksidanti pomagajo zmanjšati vnetja po vsem telesu.
Zdravstvena tveganja
Korenina repinca velja za varno za uživanje ali pitje kot čaj. Vendar pa je ta rastlina zelo podobna belladonni, ki je strupena. Priporočljivo je, da korenino repinca kupujete le od zaupanja vrednih prodajalcev in da je ne nabirate sami. Poleg tega je malo informacij o njenih učinkih na otroke ali nosečnice. Pred uporabo korenine repinca pri otrocih ali če ste noseči se posvetujte z zdravnikom.
Tukaj je še nekaj drugih možnih zdravstvenih tveganj, ki jih je treba upoštevati pri uporabi korenine repinca:
Povečana dehidracija
Korenina repinca deluje kot naravni diuretik, kar lahko povzroči dehidracijo. Če jemljete tablete za odvajanje vode ali druge diuretike, ne smete jemati korenine repinca. Če jemljete ta zdravila, je pomembno, da se zavedate drugih zdravil, zelišč in sestavin, ki lahko povzročijo dehidracijo.
Alergijska reakcija
Če ste občutljivi ali imate v preteklosti alergijske reakcije na marjetice, ambrozijo ali krizanteme, imate večje tveganje za alergijsko reakcijo na korenino repinca.
-
Veleprodajna cena 100% čisto olje AsariRadix Et Rhizoma Relax Aromatherapy Eucalyptus globulus
Študije na živalih in in vitro so raziskovale potencialne protiglivične, protivnetne in kardiovaskularne učinke sasafrasa in njegovih sestavin. Vendar pa kliničnih preskušanj primanjkuje, zato sasafras ne velja za varnega za uporabo. Safrol, glavno sestavino lubja in olja korenine sasafrasa, je ameriška Uprava za hrano in zdravila (FDA) prepovedala, vključno z uporabo kot aroma ali dišava, in se ne sme uporabljati notranje ali zunanje, saj je potencialno rakotvoren. Safrol se uporablja pri nezakoniti proizvodnji 3,4-metilen-dioksimetamfetamina (MDMA), znanega tudi pod uličnima imenoma »ekstazi« ali »Molly«, prodajo safrola in olja sasafrasa pa spremlja ameriška Uprava za boj proti drogam (DEA).
-
Veleprodajna cena 100% čisto eterično olje Stellariae Radix (novo) Sprostitvena aromaterapija Eucalyptus globulus
Kitajska farmakopeja (izdaja 2020) zahteva, da metanolni ekstrakt YCH ne sme biti manjši od 20,0 % [2], brez navedenih drugih kazalnikov kakovosti. Rezultati te študije kažejo, da je vsebnost metanolnih ekstraktov v divjih in gojenih vzorcih ustrezala farmakopejskemu standardu in da med njima ni bilo bistvene razlike. Zato med divjimi in gojenimi vzorci ni bilo očitne razlike v kakovosti glede na ta indeks. Vendar pa je bila vsebnost skupnih sterolov in skupnih flavonoidov v divjih vzorcih bistveno višja kot v gojenih vzorcih. Nadaljnja metabolomska analiza je pokazala veliko raznolikost metabolitov med divjimi in gojenimi vzorci. Poleg tega je bilo izločenih 97 bistveno različnih metabolitov, ki so navedeni vDodatna tabela S2Med temi bistveno različnimi presnovki so β-sitosterol (ID je M397T42) in derivati kvercetina (M447T204_2), za katere je bilo ugotovljeno, da so aktivne sestavine. Med diferencialne presnovke so bile vključene tudi prej neznane sestavine, kot so trigonelin (M138T291_2), betain (M118T277_2), fustin (M269T36), rotenon (M241T189), arktiin (M557T165) in loganična kislina (M399T284_2). Te komponente imajo različne vloge pri antioksidaciji, protivnetnem delovanju, lovljenju prostih radikalov, boju proti raku in zdravljenju ateroskleroze, zato bi lahko predstavljale domnevne nove aktivne sestavine v YCH. Vsebnost aktivnih sestavin določa učinkovitost in kakovost zdravilnih snovi [7]. Skratka, metanolni ekstrakt kot edini indeks za ocenjevanje kakovosti YCH ima nekatere omejitve, zato je treba nadalje raziskati bolj specifične označevalce kakovosti. Med divjim in gojenim YCH so bile ugotovljene znatne razlike v skupnih sterolih, skupnih flavonoidih in vsebnosti številnih drugih diferencialnih metabolitov; zato so med njima potencialno obstajale nekatere razlike v kakovosti. Hkrati bi lahko imele novo odkrite potencialne aktivne sestavine v YCH pomembno referenčno vrednost za preučevanje funkcionalne osnove YCH in nadaljnji razvoj virov YCH.
Pomen pristnih zdravilnih materialov je v specifični regiji izvora že dolgo priznan za proizvodnjo kitajskih zeliščnih zdravil odlične kakovosti [8]. Visoka kakovost je bistvena lastnost pristnih zdravilnih materialov, habitat pa je pomemben dejavnik, ki vpliva na kakovost takšnih materialov. Vse odkar se je YCH začel uporabljati kot zdravilo, je dolgo prevladoval divji YCH. Po uspešnem vnosu in udomačitvi YCH v Ningxii v osemdesetih letih prejšnjega stoletja se je vir zdravilnih materialov Yinchaihu postopoma preusmeril od divjega k gojenemu YCH. Glede na prejšnjo raziskavo virov YCH [9] in terenske raziskave naše raziskovalne skupine kažejo na znatne razlike v območjih razširjenosti gojenih in divjih zdravilnih snovi. Divji YCH je večinoma razširjen v avtonomni regiji Ningxia Hui v provinci Shaanxi, ki meji na sušno območje Notranje Mongolije in osrednje Ningxie. Predvsem puščavska stepa na teh območjih je najprimernejši habitat za rast YCH. Nasprotno pa je gojeni YCH večinoma razširjen južno od območja divje razširjenosti, kot sta okrožje Tongxin (gojeni I) in okolica, ki je postalo največja baza za gojenje in proizvodnjo na Kitajskem, ter okrožje Pengyang (gojeni II), ki se nahaja na bolj južnem območju in je še eno območje pridelave gojenega YCH. Poleg tega habitata zgoraj omenjenih dveh gojenih območij nista puščavska stepa. Zato poleg načina pridelave obstajajo tudi znatne razlike v habitatu divjega in gojenega YCH. Habitat je pomemben dejavnik, ki vpliva na kakovost zeliščnih zdravilnih snovi. Različni habitati vplivajo na nastanek in kopičenje sekundarnih metabolitov v rastlinah, s čimer vplivajo na kakovost zdravil [10,11]. Zato so lahko pomembne razlike v vsebnosti skupnih flavonoidov in skupnih sterolov ter izražanju 53 metabolitov, ki smo jih odkrili v tej študiji, posledica upravljanja polj in razlik v habitatih.Eden glavnih načinov, kako okolje vpliva na kakovost zdravilnih snovi, je stres, ki ga povzročajo izvorne rastline. Zmeren okoljski stres ponavadi spodbuja kopičenje sekundarnih metabolitov [12,13]. Hipoteza o ravnovesju rasti/diferenciacije pravi, da rastline, ko so hranila zadostna, predvsem rastejo, medtem ko se rastline, ko hranil primanjkuje, predvsem diferencirajo in proizvajajo več sekundarnih metabolitov [14]. Stres zaradi suše, ki ga povzroča pomanjkanje vode, je glavni okoljski stres, s katerim se soočajo rastline na sušnih območjih. V tej študiji je vodno stanje gojenega YCH bolj obilno, letna količina padavin pa je bistveno višja kot pri divjem YCH (oskrba z vodo za gojeni YCH I je bila približno 2-krat večja kot pri divjem; gojeni II pa približno 3,5-krat večja kot pri divjem). Poleg tega so tla v divjem okolju peščena, tla na kmetijskih zemljiščih pa glinena. V primerjavi z glino imajo peščena tla slabo sposobnost zadrževanja vode in bolj verjetno poslabšajo stres zaradi suše. Hkrati je proces gojenja pogosto spremljalo zalivanje, zato je bila stopnja stresa zaradi suše nizka. Divji YCH raste v ostrih naravnih aridnih habitatih, zato lahko trpi zaradi resnejšega stresa zaradi suše.Osmoregulacija je pomemben fiziološki mehanizem, s katerim se rastline spopadajo s stresom zaradi suše, alkaloidi pa so pomembni osmotski regulatorji pri višjih rastlinah [15]. Betaini so v vodi topni alkaloidi kvaternarnih amonijevih spojin in lahko delujejo kot osmoprotektanti. Sušni stres lahko zmanjša osmotski potencial celic, medtem ko osmoprotektanti ohranjajo in vzdržujejo strukturo in celovitost bioloških makromolekul ter učinkovito blažijo škodo, ki jo sušni stres povzroča rastlinam [16]. Na primer, pod stresom zaradi suše se je vsebnost betaina v sladkorni pesi in Lycium barbarum znatno povečala [17,18]. Trigonelin je regulator rasti celic in pri stresu zaradi suše lahko podaljša dolžino celičnega cikla rastline, zavre rast celic in povzroči zmanjšanje volumna celic. Relativno povečanje koncentracije topljenca v celici omogoča rastlini, da doseže osmotsko regulacijo in izboljša svojo sposobnost odpornosti na stres zaradi suše [19]. JIA X [20] ugotovili, da Astragalus membranaceus (vir tradicionalne kitajske medicine) s povečanjem stresa zaradi suše proizvaja več trigonelina, ki deluje tako, da uravnava osmotski potencial in izboljšuje sposobnost odpornosti na stres zaradi suše. Dokazano je tudi, da imajo flavonoidi pomembno vlogo pri odpornosti rastlin na stres zaradi suše [21,22]. Številne študije so potrdile, da je zmeren stres zaradi suše ugodno vplival na kopičenje flavonoidov. Lang Duo-Yong et al. [23] so primerjali učinke sušnega stresa na YCH z nadzorovanjem sposobnosti zadrževanja vode na polju. Ugotovljeno je bilo, da je sušni stres do neke mere zaviral rast korenin, vendar se je pri zmernem in hudem sušnem stresu (40 % zmogljivosti zadrževanja vode na polju) skupna vsebnost flavonoidov v YCH povečala. Medtem lahko fitosteroli pri sušnem stresu uravnavajo fluidnost in prepustnost celične membrane, zavirajo izgubo vode in izboljšajo odpornost na stres [24,25]. Zato bi lahko bilo povečano kopičenje skupnih flavonoidov, skupnih sterolov, betaina, trigonelina in drugih sekundarnih metabolitov v divjem YCH povezano z visokointenzivnim sušnim stresom.V tej študiji je bila izvedena analiza obogatitve poti KEGG na metabolitih, za katere se je izkazalo, da se bistveno razlikujejo med divjim in gojenim YCH. Obogateni metaboliti so vključevali tiste, ki sodelujejo v poteh presnove askorbata in aldarata, biosintezi aminoacil-tRNA, presnovi histidina in presnovi beta-alanina. Te presnovne poti so tesno povezane z mehanizmi odpornosti rastlin na stres. Med njimi ima presnova askorbata pomembno vlogo pri proizvodnji rastlinskih antioksidantov, presnovi ogljika in dušika, odpornosti na stres in drugih fizioloških funkcijah [26]; biosinteza aminoacil-tRNA je pomembna pot za tvorbo beljakovin [27,28], ki sodeluje pri sintezi beljakovin, odpornih na stres. Tako histidin kot β-alaninska pot lahko povečata toleranco rastlin na okoljski stres [29,30To nadalje kaže, da so bile razlike v metabolitih med divjim in gojenim YCH tesno povezane s procesi odpornosti na stres.Tla so materialna osnova za rast in razvoj zdravilnih rastlin. Dušik (N), fosfor (P) in kalij (K) v tleh so pomembni hranilni elementi za rast in razvoj rastlin. Organska snov v tleh vsebuje tudi N, P, K, Zn, Ca, Mg in druge makroelemente in elemente v sledovih, ki so potrebni za zdravilne rastline. Prekomerno ali pomanjkanje hranil ali neuravnoteženo razmerje hranil vpliva na rast in razvoj ter kakovost zdravilnih snovi, različne rastline pa imajo različne potrebe po hranilih [31,32,33]. Na primer, nizek stres zaradi dušika je spodbudil sintezo alkaloidov pri rastlini Isatis indigotica in je bil koristen za kopičenje flavonoidov v rastlinah, kot so Tetrastigma hemsleyanum, Crataegus pinnatifida Bunge in Dichondra repens Forst. Nasprotno pa je preveč dušika zaviralo kopičenje flavonoidov pri vrstah, kot so Erigeron breviscapus, Abrus cantoniensis in Ginkgo biloba, ter vplivalo na kakovost zdravilnih snovi [34]. Uporaba fosfornega gnojila je bila učinkovita pri povečanju vsebnosti glicirizinske kisline in dihidroacetona v uralskem sladkem korenu [35]. Ko je nanesena količina presegla 0,12 kg·m−2, se je skupna vsebnost flavonoidov v rastlini Tussilago farfara zmanjšala [36]. Uporaba fosfornega gnojila je negativno vplivala na vsebnost polisaharidov v rastlini Rhizoma polygonati, ki se uporablja v tradicionalni kitajski medicini [37], vendar je bilo kalijevo gnojilo učinkovito pri povečanju vsebnosti saponinov [38]. Uporaba gnojila s 450 kg·hm−2 K je bila najboljša za rast in kopičenje saponina pri dveletni rastlini Panax notoginseng [39]. Pri razmerju N:P:K = 2:2:1 so bile skupne količine hidrotermalnega ekstrakta, harpagida in harpagozida najvišje [40Visoko razmerje N, P in K je bilo koristno za spodbujanje rasti Pogostemon cablin in povečanje vsebnosti hlapnega olja. Nizko razmerje N, P in K je povečalo vsebnost glavnih učinkovitih sestavin olja stebelnih listov Pogostemon cablin [41]. YCH je rastlina, ki je odporna na neplodna tla, in ima lahko posebne zahteve glede hranil, kot so N, P in K. V tej študiji so bila tla divjih rastlin YCH v primerjavi z gojenim YCH relativno neplodna: vsebnost organskih snovi v tleh, skupnega N, skupnega P in skupnega K je bila približno 1/10, 1/2, 1/3 oziroma 1/3 vsebnosti gojenih rastlin. Zato so lahko razlike v hranilih v tleh še en razlog za razlike med metaboliti, odkritimi v gojenem in divjem YCH. Weibao Ma et al. [42] je ugotovil, da je uporaba določene količine dušikovih in fosfornih gnojil znatno izboljšala pridelek in kakovost semen. Vendar pa vpliv hranilnih elementov na kakovost YCH ni jasen, zato je treba nadaljnje raziskave o gnojilnih ukrepih za izboljšanje kakovosti zdravilnih snovi.Kitajska zeliščna zdravila imajo značilnosti »Ugodna rastišča spodbujajo pridelek, neugodna rastišča pa izboljšujejo kakovost« [43]. V procesu postopnega prehoda iz divjega v gojeni YCH se je habitat rastlin spremenil iz sušne in neplodne puščavske stepe v rodovitna kmetijska zemljišča z obilnejšo vodo. Habitat gojenega YCH je boljši in pridelek je višji, kar je v pomoč pri zadovoljevanju tržnega povpraševanja. Vendar pa je ta boljši habitat privedel do pomembnih sprememb v metabolitih YCH; ali to prispeva k izboljšanju kakovosti YCH in kako doseči visokokakovostno proizvodnjo YCH z znanstveno utemeljenimi gojitvenimi ukrepi, bodo potrebne nadaljnje raziskave.Simulativno gojenje habitatov je metoda simulacije habitatnih in okoljskih razmer divjih zdravilnih rastlin, ki temelji na poznavanju dolgoročne prilagoditve rastlin specifičnim okoljskim stresom [43]. S simulacijo različnih okoljskih dejavnikov, ki vplivajo na divje rastline, zlasti na prvotni habitat rastlin, ki se uporabljajo kot viri avtentičnih zdravilnih snovi, pristop uporablja znanstveno zasnovo in inovativen človeški poseg za uravnoteženje rasti in sekundarnega metabolizma kitajskih zdravilnih rastlin [43]. Namen metod je doseči optimalne ureditve za razvoj visokokakovostnih zdravilnih materialov. Simulativno gojenje habitatov bi moralo zagotoviti učinkovit način za visokokakovostno proizvodnjo YCH, tudi če farmakodinamična osnova, označevalci kakovosti in mehanizmi odzivanja na okoljske dejavnike niso jasni. V skladu s tem predlagamo, da se znanstveno načrtovanje in ukrepi upravljanja polj pri gojenju in proizvodnji YCH izvajajo ob upoštevanju okoljskih značilnosti divjega YCH, kot so sušna, nerodovitna in peščena tla. Hkrati upamo, da bodo raziskovalci izvedli poglobljene raziskave o funkcionalni materialni osnovi in označevalcih kakovosti YCH. Te študije lahko zagotovijo učinkovitejša merila za ocenjevanje YCH ter spodbudijo visokokakovostno proizvodnjo in trajnostni razvoj industrije. -
Zeliščno olje Fructus Amomi Naravni masažni difuzorji 1 kg v razsutem stanju Eterično olje Amomum villosum
Družina Zingiberaceae je pritegnila vse večjo pozornost v alelopatnih raziskavah zaradi bogatih hlapnih olj in aromatičnosti svojih vrst. Prejšnje raziskave so pokazale, da kemikalije iz Curcuma zedoaria (zedoary) [40], Alpinia zerumbet (Pers.) BLBurtt & RMSm. [41] in Zingiber officinale Rosc. [42] iz družine ingverja imajo alelopatne učinke na kalitev semen in rast sadik koruze, solate in paradižnika. Naša trenutna študija je prvo poročilo o alelopatni aktivnosti hlapnih snovi iz stebel, listov in mladih plodov A. villosum (član družine Zingiberaceae). Izkoristek olja iz stebel, listov in mladih plodov je bil 0,15 %, 0,40 % oziroma 0,50 %, kar kaže, da so plodovi proizvedli večjo količino hlapnih olj kot stebla in listi. Glavne sestavine hlapnih olj iz stebel so bile β-pinen, β-felandren in α-pinen, kar je bil vzorec, podoben vzorcu glavnih kemikalij listnega olja, β-pinena in α-pinena (monoterpenskih ogljikovodikov). Po drugi strani pa je bilo olje v mladih plodovih bogato z bornil acetatom in kafro (oksigeniranimi monoterpeni). Rezultate so podprle ugotovitve Do N Daija [30,32] in Hui Ao [31], ki je identificiral olja iz različnih organov A. villosum.
Obstaja več poročil o zaviralnem delovanju teh glavnih spojin na rast rastlin pri drugih vrstah. Shalinder Kaur je ugotovila, da je α-pinen iz evkaliptusa pri koncentraciji 1,0 μL izrazito zaviral dolžino korenin in višino poganjkov Amaranthus viridis L. [43], druga študija pa je pokazala, da α-pinen zavira zgodnjo rast korenin in povzroča oksidativne poškodbe v koreninskem tkivu zaradi povečanega nastajanja reaktivnih kisikovih spojin [44]. Nekatera poročila trdijo, da je β-pinen zaviral kalitev in rast sadik testnih plevelov na način, ki je odvisen od odmerka, tako da je motil celovitost membrane [45], spreminjanje biokemije rastlin in povečanje aktivnosti peroksidaz in polifenol oksidaz [46]. β-Phelandren je pokazal največjo inhibicijo kalitve in rasti Vigna unguiculata (L.) Walp pri koncentraciji 600 ppm [47], medtem ko je kafra pri koncentraciji 250 mg/m3 zavirala rast korenin in poganjkov vrste Lepidium sativum L. [48]. Vendar pa je raziskav, ki poročajo o alelopatnem učinku bornil acetata, malo. V naši študiji so bili alelopatni učinki β-pinena, bornil acetata in kafre na dolžino korenin šibkejši kot pri hlapnih oljih, razen pri α-pinenu, medtem ko je bilo olje listov, bogato z α-pinenom, tudi bolj fitotoksično kot ustrezna hlapna olja iz stebel in plodov A. villosum, kar obe ugotovitvi kažeta, da bi α-pinen lahko bil pomembna kemikalija za alelopatijo pri tej vrsti. Hkrati rezultati nakazujejo tudi, da bi nekatere spojine v olju plodov, ki niso bile v izobilju, lahko prispevale k nastanku fitotoksičnega učinka, kar je ugotovitev, ki jo je treba v prihodnosti nadaljnje raziskati.V normalnih pogojih je alelopatni učinek alelokemikalij vrstno specifičen. Jiang in sodelavci so ugotovili, da je eterično olje, ki ga proizvaja Artemisia sieversiana, imelo močnejši učinek na Amaranthus retroflexus L. kot na Medicago sativa L., Poa annua L. in Pennisetum alopecuroides (L.) Spreng. [49]. V drugi študiji je hlapno olje Lavandula angustifolia Mill. povzročilo različne stopnje fitotoksičnih učinkov na različne rastlinske vrste. Lolium multiflorum Lam. je bila najobčutljivejša akceptorska vrsta, rast hipokotila in radikul pa je bila pri odmerku 1 μL/mL olja zavrta za 87,8 % oziroma 76,7 %, rast hipokotila sadik kumar pa je bila komaj prizadeta [20Naši rezultati so pokazali tudi razliko v občutljivosti na hlapne snovi A. villosum med vrstami L. sativa in L. perenne.Hlapne spojine in eterična olja iste vrste se lahko količinsko in/ali kakovostno razlikujejo zaradi rastnih pogojev, delov rastline in metod detekcije. Na primer, poročilo je pokazalo, da sta bili piranoid (10,3 %) in β-kariofilen (6,6 %) glavni spojini hlapnih snovi, ki se sproščajo iz listov Sambucus nigra, medtem ko so bili benzaldehid (17,8 %), α-bulnesen (16,6 %) in tetrakosan (11,5 %) v izobilju v oljih, ekstrahiranih iz listov [50V naši študiji so imele hlapne spojine, ki so jih sproščale sveže rastlinske snovi, močnejše alelopatne učinke na testne rastline kot ekstrahirana hlapna olja, pri čemer so bile razlike v odzivu tesno povezane z razlikami v alelokemikalijah, prisotnih v obeh pripravkih. Natančne razlike med hlapnimi spojinami in olji je treba nadalje raziskati v nadaljnjih poskusih.Razlike v mikrobni raznolikosti in strukturi mikrobne združbe v vzorcih tal, ki so jim bila dodana hlapna olja, so bile povezane s konkurenco med mikroorganizmi, pa tudi s toksičnimi učinki in trajanjem hlapnih olj v tleh. Vokou in Liotiri [51] je ugotovila, da je nanos štirih eteričnih olj (0,1 ml) na obdelano zemljo (150 g) aktiviral dihanje vzorcev tal, čeprav so se olja razlikovala po svoji kemični sestavi, kar kaže na to, da rastlinska olja prisotni talni mikroorganizmi uporabljajo kot vir ogljika in energije. Podatki, pridobljeni v tej študiji, so potrdili, da so olja iz celotne rastline A. villosum prispevala k očitnemu povečanju števila vrst talnih gliv do 14. dne po dodatku olja, kar kaže na to, da lahko olje zagotavlja vir ogljika za več talnih gliv. Druga študija je poročala o ugotovitvi: talni mikroorganizmi so si po začasnem obdobju variacij, ki ga je povzročil dodatek olja Thymbra capitata L. (Cav), povrnili svojo prvotno funkcijo in biomaso, vendar olje v najvišjem odmerku (0,93 µL olja na gram tal) ni omogočilo talnim mikroorganizmom, da bi si povrnili prvotno funkcionalnost [52]. V tej študiji smo na podlagi mikrobiološke analize tal po obdelavi z različnimi dnevi in koncentracijami domnevali, da si bo talna bakterijska združba po več dneh opomogla. Nasprotno pa se glivična mikrobiota ne more vrniti v prvotno stanje. Naslednji rezultati potrjujejo to hipotezo: analiza glavnih koordinat (PCoA) je pokazala izrazit učinek visoke koncentracije olja na sestavo talnega glivičnega mikrobioma, predstavitve toplotnih kart pa so ponovno potrdile, da se sestava glivične združbe tal, obdelanih s 3,0 mg/ml olja (in sicer 0,375 mg olja na gram tal) na ravni rodu, precej razlikuje od drugih obdelav. Trenutno so raziskave o učinkih dodajanja monoterpenskih ogljikovodikov ali oksigeniranih monoterpenov na raznolikost in strukturo talnih mikrobov še vedno redke. Nekaj študij je poročalo, da je α-pinen povečal aktivnost talnih mikrobov in relativno številčnost Methylophilaceae (skupina metilotrofov, Proteobacteria) pri nizki vsebnosti vlage, kar igra pomembno vlogo kot vir ogljika v bolj suhih tleh [53]. Podobno hlapno olje celotne rastline A. villosum, ki vsebuje 15,03 % α-pinena (Dodatna tabela S1), je očitno povečal relativno številčnost proteobakterij pri 1,5 mg/ml in 3,0 mg/ml, kar je nakazovalo, da α-pinen morda deluje kot eden od virov ogljika za talne mikroorganizme.Hlapne spojine, ki jih proizvajajo različni organi vrste A. villosum, so imele različno stopnjo alelopatnih učinkov na L. sativa in L. perenne, kar je bilo tesno povezano s kemičnimi sestavinami, ki jih vsebujejo deli rastline A. villosum. Čeprav je bila kemična sestava hlapnega olja potrjena, hlapne spojine, ki jih sprošča A. villosum pri sobni temperaturi, niso znane in zahtevajo nadaljnje raziskave. Poleg tega je vreden pozornosti tudi sinergijski učinek med različnimi alelokemikalijami. Kar zadeva mikroorganizme v tleh, moramo za celovito raziskavo vpliva hlapnega olja na mikroorganizme v tleh še vedno izvesti poglobljene raziskave: podaljšati čas obdelave hlapnega olja in ugotoviti razlike v kemični sestavi hlapnega olja v tleh v različnih dneh. -
Čisto olje Artemisia capillaris za izdelavo sveč in mila, veleprodajno eterično olje za difuzorje, novo za difuzorje za gorilnike
Zasnova modela glodavcev
Živali so bile naključno razdeljene v pet skupin po petnajst miši. Kontrolna in modelna skupina miši so prejelesezamovo olje6 dni. Miši v pozitivni kontrolni skupini so 6 dni preko sonde dajale tablete bifendata (BT, 10 mg/kg). Poskusne skupine so 6 dni prejemale 100 mg/kg in 50 mg/kg AEO, raztopljenega v sezamovem olju. 6. dan je kontrolna skupina prejemala sezamovo olje, vse ostale skupine pa so enkratni odmerek 0,2 % CCl4 v sezamovem olju (10 ml/kg).intraperitonealna injekcijaMiši so nato postili in jim dali vodo, iz retrobulbarnih žil pa so odvzeli vzorce krvi; odvzeto kri so centrifugirali pri 3000 ×g10 minut, da se serum loči.Izpah vratne hrbteniceje bila opravljena takoj po odvzemu krvi, vzorci jeter pa so bili takoj odstranjeni. En del vzorca jeter je bil takoj shranjen pri -20 °C do analize, drugi del pa je bil izrezan in fiksiran v 10 %formalinraztopina; preostala tkiva so bila shranjena pri -80 °C za histopatološko analizo (Wang in drugi, 2008,Hsu in drugi, 2009,Nie et al., 2015).
Merjenje biokemijskih parametrov v serumu
Poškodbo jeter so ocenili z ocenoencimske aktivnostiserumske ALT in AST z uporabo ustreznih komercialnih kompletov v skladu z navodili za komplete (Nanjing, provinca Jiangsu, Kitajska). Encimske aktivnosti so bile izražene v enotah na liter (U/l).
Merjenje MDA, SOD, GSH in GSH-Pxv homogenatih jeter
Jetrna tkiva so bila homogenizirana s hladno fiziološko raztopino v razmerju 1:9 (m/v, jetra:fiziološka raztopina). Homogenate so centrifugirali (2500 ×g10 minut) za zbiranje supernatantov za nadaljnje določitve. Poškodbe jeter so bile ocenjene glede na jetrne meritve ravni MDA in GSH ter SOD in GSH-P.xaktivnosti. Vse te so bile določene po navodilih na kompletu (Nanjing, provinca Jiangsu, Kitajska). Rezultati za MDA in GSH so bili izraženi kot nmol na mg beljakovin (nmol/mg prot), aktivnosti SOD in GSH-P pa kot ...xso bile izražene kot enota na mg beljakovin (E/mg prot).
Histopatološka analiza
Dele sveže pridobljenih jeter smo fiksirali v 10 % puferiranemparaformaldehidraztopino fosfata. Vzorec smo nato vgradili v parafin, narezali na 3–5 μm debele rezine in obarvali zhematoksilinineozin(H&E) po standardnem postopku in na koncu analiziran zsvetlobna mikroskopija(Tian et al., 2012).
Statistična analiza
Rezultati so bili izraženi kot povprečje ± standardni odklon (SD). Rezultati so bili analizirani z uporabo statističnega programa SPSS Statistics, različice 19.0. Podatki so bili podvrženi analizi variance (ANOVA,p< 0,05), ki mu je sledil Dunnettov test in Dunnettov T3 test za določitev statistično pomembnih razlik med vrednostmi različnih eksperimentalnih skupin. Pomembna razlika je bila upoštevana na ravnip< 0,05.
Rezultati in razprava
Sestavine AEO
Pri analizi GC/MS je bilo ugotovljeno, da AEO vsebuje 25 sestavin, eluiranih od 10 do 35 minut, identificiranih pa je bilo 21 sestavin, ki predstavljajo 84 % eteričnega olja (Tabela 1). Vsebovano hlapno oljemonoterpenoidi(80,9 %), seskviterpenoidi (9,5 %), nasičeni nerazvejani ogljikovodiki (4,86 %) in mešani acetilen (4,86 %). V primerjavi z drugimi študijami (Guo in drugi, 2004) smo v AEO našli obilno količino monoterpenoidov (80,90 %). Rezultati so pokazali, da je najpogostejša sestavina AEO β-citronelol (16,23 %). Druge glavne sestavine AEO vključujejo 1,8-cineol (13,9 %),kafra(12,59 %),linalol(11,33 %), α-pinen (7,21 %), β-pinen (3,99 %),timol(3,22 %) inmircen(2,02 %). Sprememba kemične sestave je lahko povezana z okoljskimi pogoji, ki jim je bila rastlina izpostavljena, kot so mineralna voda, sončna svetloba, stopnja razvoja inprehrana.
-
Čisto olje Saposhnikovia divaricata za izdelavo sveč in mila, veleprodajno eterično olje za difuzorje, novo za difuzorje za gorilnike
2.1 Priprava SDE
Korenike SD so bile kupljene kot posušeno zelišče pri podjetju Hanherb Co. (Guri, Koreja). Rastlinski material je taksonomsko potrdil dr. Go-Ya Choi s Korejskega inštituta za orientalsko medicino (KIOM). Vzorec potrdila (številka 2014 SDE-6) je bil shranjen v korejskem herbariju standardnih zeliščnih virov. Posušene korenike SD (320 g) so bile dvakrat ekstrahirane s 70 % etanolom (z 2-urnim refluksom) in nato ekstrakt koncentriran pod znižanim tlakom. Prevretek je bil filtriran, liofiliziran in shranjen pri 4 °C. Izkoristek posušenega ekstrakta iz surovih vhodnih snovi je bil 48,13 % (m/m).
2.2 Kvantitativna analiza z visokozmogljivo tekočinsko kromatografijo (HPLC)
Kromatografska analiza je bila izvedena s sistemom HPLC (Waters Co., Milford, MA, ZDA) in detektorjem s fotodiodnim nizom. Za HPLC analizo SDE je bil uporabljen primarni...O-standard glukozilcimifugina je bil kupljen pri Korejskem inštitutu za promocijo tradicionalne medicine (Gyeongsan, Koreja) insek-O-glukozilhamaudol in 4′-O-β-D-glukozil-5-OV našem laboratoriju smo izolirali in identificirali β-metilvisaminol s spektralnimi analizami, predvsem z NMR in MS.
Vzorce SDE (0,1 mg) smo raztopili v 70 % etanolu (10 ml). Kromatografsko ločevanje smo izvedli s kolono XSelect HSS T3 C18 (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, ZDA). Mobilna faza je bila sestavljena iz acetonitrila (A) in 0,1 % ocetne kisline v vodi (B) s pretokom 1,0 ml/min. Uporabljen je bil večstopenjski gradientni program, kot sledi: 5 % A (0 min), 5–20 % A (0–10 min), 20 % A (10–23 min) in 20–65 % A (23–40 min). Detekcijska valovna dolžina je bila skenirana pri 210–400 nm in zabeležena pri 254 nm. Injicirani volumen je bil 10,0.μL. Standardne raztopine za določanje treh kromonov so bile pripravljene s končno koncentracijo 7,781 mg/ml (prim-O-glukozilcimifugin), 31,125 mg/ml (4′-O-β-D-glukozil-5-O-metilvisaminol) in 31,125 mg/ml (sek-O-glukozilhamaudol) v metanolu in shranjen pri 4 °C.
2.3. Vrednotenje protivnetnega delovanjaIn vitro
2.3.1 Celična kultura in obdelava vzorcev
Celice RAW 264.7 so bile pridobljene iz zbirke American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, ZDA) in gojene v gojišču DMEM, ki je vsebovalo 1 % antibiotikov in 5,5 % FBS. Celice so bile inkubirane v vlažni atmosferi s 5 % CO2 pri 37 °C. Za stimulacijo celic je bil medij nadomeščen s svežim gojiščem DMEM in lipopolisaharidom (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, ZDA) pri 1 °C.μg/ml je bil dodan v prisotnosti ali odsotnosti SDE (200 ali 400μg/ml) dodatnih 24 ur.
2.3.2 Določanje dušikovega oksida (NO), prostaglandina E2 (PGE2), faktorja tumorske nekrozeα(TNF-α) in proizvodnjo interlevkina-6 (IL-6)
Celice so bile obdelane z SDE in stimulirane z LPS 24 ur. Produkcija NO je bila analizirana z merjenjem nitrita z uporabo Griessovega reagenta v skladu s prejšnjo študijo [12]. Izločanje vnetnih citokinov PGE2, TNF-α, IL-6 pa je bil določen z uporabo kompleta ELISA (R&D systems) v skladu z navodili proizvajalca. Učinki SDE na proizvodnjo NO in citokinov so bili določeni pri 540 nm ali 450 nm z uporabo Wallac EnVision.™čitalnik mikroplošč (PerkinElmer).
2.4. Vrednotenje antiosteoartritične aktivnostiIn vivo
2.4.1 Živali
Samci podgan Sprague-Dawley (stari 7 tednov) so bili kupljeni pri podjetju Samtako Inc. (Osan, Koreja) in nameščeni v nadzorovanih pogojih z 12-urnim ciklom svetlobe/teme pri°C in% vlažnosti. Podganam je bila zagotovljena laboratorijska prehrana in voda.po željiVsi eksperimentalni postopki so bili izvedeni v skladu s smernicami Nacionalnega inštituta za zdravje (NIH) in odobreni s strani Odbora za oskrbo in uporabo živali Univerze Daejeon (Daejeon, Republika Koreja).
2.4.2. Indukcija OA z MIA pri podganah
Živali so bile naključno razvrščene in dodeljene v skupine za zdravljenje pred začetkom študije (na skupino). Raztopina MIA (3 mg/50μV intraartikularni prostor desnega kolena je bil pod anestezijo, ki jo je sprožila mešanica ketamina in ksilazina, neposredno injiciran 1 l 0,9-odstotne fiziološke raztopine. Podgane so bile naključno razdeljene v štiri skupine: (1) skupina s fiziološko raztopino brez injekcije MIA, (2) skupina z MIA in injekcijo MIA, (3) skupina, zdravljena z SDE (200 mg/kg) z injekcijo MIA, in (4) skupina, zdravljena z indometacinom (IM) (2 mg/kg) z injekcijo MIA. Podganam je bil SDE in IM dan peroralno 1 teden pred injekcijo MIA 4 tedne. Odmerjanje SDE in IM, uporabljeno v tej študiji, je temeljilo na odmerkih, uporabljenih v prejšnjih študijah [10,13,14].
2.4.3. Meritve porazdelitve obremenitve zadnjih šap
Po indukciji osteoartritisa (OA) je bilo prvotno ravnovesje v nosilnosti zadnjih šap porušeno. Za oceno sprememb v toleranci nosilnosti je bil uporabljen tester onesposobljenosti (Linton Instrumentation, Norfolk, Združeno kraljestvo). Podgane so bile previdno nameščene v merilno komoro. Sila nosilnosti, ki jo je izvajala zadnja šapa, je bila povprečena v obdobju 3 sekund. Razmerje porazdelitve teže je bilo izračunano po naslednji enačbi: [teža na desni zadnji šapi/(teža na desni zadnji šapi + teža na levi zadnji šapi)] × 100 [15].
2.4.4 Meritve ravni citokinov v serumu
Vzorce krvi smo centrifugirali pri 1500 g 10 minut pri 4 °C; nato smo zbrali serum in ga shranili pri -70 °C do uporabe. Ravni IL-1β, IL-6, TNF-α, in PGE2 v serumu smo merili z uporabo kompletov ELISA podjetja R&D Systems (Minneapolis, MN, ZDA) v skladu z navodili proizvajalca.
2.4.5. Kvantitativna analiza RT-PCR v realnem času
Celotna RNA je bila ekstrahirana iz tkiva kolenskega sklepa z uporabo reagenta TRI® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ZDA), reverzno transkribirana v cDNA in PCR-amplificirana z uporabo kompleta TM One Step RT PCR z barvo SYBR green (Applied Biosystems, Grand Island, NY, ZDA). Kvantitativna PCR v realnem času je bila izvedena z uporabo sistema Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, ZDA). Zaporedja začetnih oligonukleotidov in zaporedje sond so prikazana v tabeli.1Alikvote vzorčnih cDNA in enako količino cDNA GAPDH smo pomnožili z glavno mešanico TaqMan® Universal PCR, ki je vsebovala DNA polimerazo, v skladu z navodili proizvajalca (Applied Biosystems, Foster, CA, ZDA). Pogoji PCR so bili 2 minuti pri 50 °C, 10 minut pri 94 °C, 15 sekund pri 95 °C in 1 minuta pri 60 °C za 40 ciklov. Koncentracijo ciljnega gena smo določili s primerjalno metodo Ct (pragovno število ciklov na presečišču med amplifikacijskim diagramom in pragom) v skladu z navodili proizvajalca.
