Čisto olje Saposhnikovia divaricata za izdelavo sveč in mila, veleprodajno eterično olje za difuzorje, novo za difuzorje za gorilnike

kratek opis:

 

2.1 Priprava SDE

Korenike SD so bile kupljene kot posušeno zelišče pri podjetju Hanherb Co. (Guri, Koreja). Rastlinski material je taksonomsko potrdil dr. Go-Ya Choi s Korejskega inštituta za orientalsko medicino (KIOM). Vzorec potrdila (številka 2014 SDE-6) je bil shranjen v korejskem herbariju standardnih zeliščnih virov. Posušene korenike SD (320 g) so bile dvakrat ekstrahirane s 70 % etanolom (z 2-urnim refluksom) in nato ekstrakt koncentriran pod znižanim tlakom. Prevretek je bil filtriran, liofiliziran in shranjen pri 4 °C. Izkoristek posušenega ekstrakta iz surovih vhodnih snovi je bil 48,13 % (m/m).

 

2.2 Kvantitativna analiza z visokozmogljivo tekočinsko kromatografijo (HPLC)

Kromatografska analiza je bila izvedena s sistemom HPLC (Waters Co., Milford, MA, ZDA) in detektorjem s fotodiodnim nizom. Za HPLC analizo SDE je bil uporabljen primarni...O-standard glukozilcimifugina je bil kupljen pri Korejskem inštitutu za promocijo tradicionalne medicine (Gyeongsan, Koreja) insek-O-glukozilhamaudol in 4′-O-β-D-glukozil-5-OV našem laboratoriju smo izolirali in identificirali β-metilvisaminol s spektralnimi analizami, predvsem z NMR in MS.

Vzorce SDE (0,1 mg) smo raztopili v 70 % etanolu (10 ml). Kromatografsko ločevanje smo izvedli s kolono XSelect HSS T3 C18 (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, ZDA). Mobilna faza je bila sestavljena iz acetonitrila (A) in 0,1 % ocetne kisline v vodi (B) s pretokom 1,0 ml/min. Uporabljen je bil večstopenjski gradientni program, kot sledi: 5 % A (0 min), 5–20 % A (0–10 min), 20 % A (10–23 min) in 20–65 % A (23–40 min). Detekcijska valovna dolžina je bila skenirana pri 210–400 nm in zabeležena pri 254 nm. Injicirani volumen je bil 10,0.μL. Standardne raztopine za določanje treh kromonov so bile pripravljene s končno koncentracijo 7,781 mg/ml (prim-O-glukozilcimifugin), 31,125 mg/ml (4′-O-β-D-glukozil-5-O-metilvisaminol) in 31,125 mg/ml (sek-O-glukozilhamaudol) v metanolu in shranjen pri 4 °C.

2.3. Vrednotenje protivnetnega delovanjaIn vitro

2.3.1 Celična kultura in obdelava vzorcev

Celice RAW 264.7 so bile pridobljene iz zbirke American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, ZDA) in gojene v gojišču DMEM, ki je vsebovalo 1 % antibiotikov in 5,5 % FBS. Celice so bile inkubirane v vlažni atmosferi s 5 % CO2 pri 37 °C. Za stimulacijo celic je bil medij nadomeščen s svežim gojiščem DMEM in lipopolisaharidom (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, ZDA) pri 1 °C.μg/ml je bil dodan v prisotnosti ali odsotnosti SDE (200 ali 400μg/ml) dodatnih 24 ur.

2.3.2 Določanje dušikovega oksida (NO), prostaglandina E2 (PGE2), faktorja tumorske nekrozeα(TNF-α) in proizvodnjo interlevkina-6 (IL-6)

Celice so bile obdelane z SDE in stimulirane z LPS 24 ur. Produkcija NO je bila analizirana z merjenjem nitrita z uporabo Griessovega reagenta v skladu s prejšnjo študijo [12]. Izločanje vnetnih citokinov PGE2, TNF-α, IL-6 pa je bil določen z uporabo kompleta ELISA (R&D systems) v skladu z navodili proizvajalca. Učinki SDE na proizvodnjo NO in citokinov so bili določeni pri 540 nm ali 450 nm z uporabo Wallac EnVision.™čitalnik mikroplošč (PerkinElmer).

2.4. Vrednotenje antiosteoartritične aktivnostiIn vivo

2.4.1 Živali

Samce podgan Sprague-Dawley (stare 7 tednov) smo kupili pri podjetju Samtako Inc. (Osan, Koreja) in jih nastanili v nadzorovanih pogojih z 12-urnim ciklom svetlobe/teme pri°C in% vlažnosti. Podganam je bila zagotovljena laboratorijska prehrana in voda.po željiVsi eksperimentalni postopki so bili izvedeni v skladu s smernicami Nacionalnega inštituta za zdravje (NIH) in odobreni s strani Odbora za oskrbo in uporabo živali Univerze Daejeon (Daejeon, Republika Koreja).

2.4.2. Indukcija OA z MIA pri podganah

Živali so bile naključno razvrščene in dodeljene v skupine za zdravljenje pred začetkom študije (na skupino). Raztopina MIA (3 mg/50μV intraartikularni prostor desnega kolena je bil pod anestezijo, ki jo je sprožila mešanica ketamina in ksilazina, neposredno injiciran 1 l 0,9-odstotne fiziološke raztopine. Podgane so bile naključno razdeljene v štiri skupine: (1) skupina s fiziološko raztopino brez injekcije MIA, (2) skupina z MIA in injekcijo MIA, (3) skupina, zdravljena z SDE (200 mg/kg) z injekcijo MIA, in (4) skupina, zdravljena z indometacinom (IM) (2 mg/kg) z injekcijo MIA. Podganam je bil SDE in IM dan peroralno 1 teden pred injekcijo MIA 4 tedne. Odmerjanje SDE in IM, uporabljeno v tej študiji, je temeljilo na odmerkih, uporabljenih v prejšnjih študijah [10,13,14].

2.4.3. Meritve porazdelitve obremenitve zadnjih šap

Po indukciji osteoartritisa (OA) je bilo prvotno ravnovesje v nosilnosti zadnjih šap porušeno. Za oceno sprememb v toleranci nosilnosti je bil uporabljen tester onesposobljenosti (Linton Instrumentation, Norfolk, Združeno kraljestvo). Podgane so bile previdno nameščene v merilno komoro. Sila nosilnosti, ki jo je izvajala zadnja šapa, je bila povprečena v obdobju 3 sekund. Razmerje porazdelitve teže je bilo izračunano po naslednji enačbi: [teža na desni zadnji šapi/(teža na desni zadnji šapi + teža na levi zadnji šapi)] × 100 [15].

2.4.4 Meritve ravni citokinov v serumu

Vzorce krvi smo centrifugirali pri 1500 g 10 minut pri 4 °C; nato smo zbrali serum in ga shranili pri -70 °C do uporabe. Ravni IL-1β, IL-6, TNF-α, in PGE2 v serumu smo merili z uporabo kompletov ELISA podjetja R&D Systems (Minneapolis, MN, ZDA) v skladu z navodili proizvajalca.

2.4.5. Kvantitativna analiza RT-PCR v realnem času

Celotna RNA je bila ekstrahirana iz tkiva kolenskega sklepa z uporabo reagenta TRI® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ZDA), reverzno transkribirana v cDNA in PCR-amplificirana z uporabo kompleta TM One Step RT PCR z barvo SYBR green (Applied Biosystems, Grand Island, NY, ZDA). Kvantitativna PCR v realnem času je bila izvedena z uporabo sistema Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, ZDA). Zaporedja začetnih oligonukleotidov in zaporedje sond so prikazana v tabeli.1Alikvote vzorčnih cDNA in enako količino cDNA GAPDH smo pomnožili z glavno mešanico TaqMan® Universal PCR, ki je vsebovala DNA polimerazo, v skladu z navodili proizvajalca (Applied Biosystems, Foster, CA, ZDA). Pogoji PCR so bili 2 minuti pri 50 °C, 10 minut pri 94 °C, 15 sekund pri 95 °C in 1 minuta pri 60 °C za 40 ciklov. Koncentracijo ciljnega gena smo določili s primerjalno metodo Ct (pragovno število ciklov na presečišču med amplifikacijskim diagramom in pragom) v skladu z navodili proizvajalca.

Cena FOB:0,5–9.999 USD/kos

Minimalna količina naročila:100 kosov

Zmogljivost dobave:10000 kosov/kosov na mesec